植物激素脱落酸（ABA）ELISA试剂盒说明书 植物激素脱落酸（ABA）ELISA试剂盒说明书 　　本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!　　预期利用　　ELISA法定量测定植物植物组织、细胞或其它相干样本中ABA含量。　　实验原理　　用纯化的ABA抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中顺次加入标本或标准品、生物素化的ABA抗体、HRP标记的亲和素，经过完全洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的ABA呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(值)，计算样品浓度。　　试剂盒组成及试剂配制　　1、 酶标板：1块(96孔)　　2、 标准品(冻干品)：2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100nmol/ml，然后做系列倍比稀释(注：不要直

　　本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!

　　预期利用

　　ELISA法定量测定植物植物组织、细胞或其它相干样本中ABA含量。

　　实验原理

　　用成品鞋耐曲折实验机纯化的ABA抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中顺次加入标本或标准品、生物素化的ABA抗体、HRP标记的亲和素，经过完全洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的ABA呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(值)，计算样品浓度。

　　试剂盒组成及试剂配制

　　1、 酶标板：1块(96孔)

　　2、 标准品(冻干品)：2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100nmol/ml，然后做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)，分别配制成100 nmol/ml，50 nmol/ml，25nmol/ml，12.5 nmol/ml，6.25 nmol/mjames止滑实验机l，3.12 nmol/ml，1.56nmol/ml，样品稀释液直接作为空白孔 0 nmol/ml。如配制50 nmol/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml)100 nmol/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀便可，其余浓度以此类推。

　　3、 样品稀释液：1×20ml。

　　4、 检测稀释液A：1×10ml。

　　5、 检测稀释液B：1×10ml。

　　6、 检测溶液A：1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液A 1:100稀释(如：10 检测溶液A / 990检测稀释液A)，充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100 /孔)，实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。

　　7、 检测溶液B：1×120 /瓶(1:100)。临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。

　　8、 底物溶液：1×10ml/瓶。

　　9、 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

　　10、终止液：1×10ml/瓶(2 mol/L H2SO4)。

　　11、覆膜：5张

　　12、使用说明书：1份

　　自备物品

　　1、 酶标仪(建议仪器使用条件前预热)

　　2、 微量加液器及吸头，EP管

　　3、 蒸馏水或去离子水，滤纸

　　植物标本的收集及保存

　　1、自行车冲击实验机 新鲜植物组织请在液氮中充分研磨;

　　2、 加入样品体积3倍的提取液(10% TCA), 置于⑵0 过夜;

　　3、 请于4 ，8000rpm，离心1小时，弃上清，搜集沉淀;

　　4、 沉淀加入等体积的冰浴丙酮，混匀后于4 离心(8000rpm，15分钟)，弃上清并真空干燥，保存备用;

　　5、 上样前加入裂解液(2.7g 尿素，0.2g CHAPS，溶于去离子水中至终体积5ml)，混匀后室温放置30分钟，然后4离心(8000rpm，15分钟)，取上清并暂时保存于4 待用。

　　注：以上标本均应密封保存，4 保存应小于1周，⑵0 不应超过1个月，⑻0 不应超过2个月;

　　操作步骤

　　实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37溶解;试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽可能避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度太高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

　　1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加标准品或待测样品100，注意不要有气泡，加样 时将样品加于酶标板底部，尽可能不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37 温育2小时。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

　　2、 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100 (临用前配制)，酶标板加上覆膜，37 温育1小时。

　　3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1⑵分钟，大约400 /每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

　　4、 每耐变黄实验机孔加检测溶液B工作液(临用前配制)100 ，加上覆膜，37 温育1小时。

　　5、 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。

　　6、 每孔加底物溶液90 ，酶标板加上覆膜37避光显色(反应时间控制在15⑶0分钟，当标准孔的前3⑷孔有明显的梯度蓝色，后3⑷孔梯度不明显时，便可终止)。

　　7、 每孔加终止溶液50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽可能与底物 液的加入顺序相同。

　　8、 马上用酶标仪在450nm波长丈量各孔的光密度( 值)。

　　注：

　　1、 试剂准备：所有试剂在使用前应平衡至室温，使用后请马上依照说明书要求保存试剂。实验操作中请使用1次性的吸头，避免交叉污染。

　　2、 加样：加样或加试剂时，第1个孔与最后1个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会致使不同的“预温育”时间，从而明显地影响到丈量值的准确性及重复性。1次加数显简支梁冲击实验机样木制家具力学综合实验机时间(包括标准品及所有样品)最好控制在10分钟内。推荐设置复孔进行实验。

　　3、温育：为避免样品蒸发，实验时将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作，任什么时候侯都应避免酶标板沙浆压力实验机处于干燥状态;同时应严格遵照给定的温育时间和温度。

　　4、洗涤：洗涤进程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。

　　5、 试剂配制：Detection A及DetectionB在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请根据所需的量配制使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽可能不要微量配制(如汲取检测溶液A时，1次不要小于10)，以免由于不准确稀 释而造成浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液。

　　6、反应时间的控制：加入底物后请定时视察反应孔的色彩变化(比如，每隔10分钟)，如色彩较深，请提早加入终止液终止jye2000型数显式压力实验机反应，避免反塑料管材耐压爆破实验机应过强从而影响酶标仪光密度读数。

　　7、 底物：底物请避光保电线电缆拉力实验机存，在贮存和温育时避免强光直接照耀。

　　洗板方法

　　1、手工洗板方法：将推荐的洗涤缓冲液最少0.4ml注入孔内，浸泡1⑵分钟，吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体，在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次;根据需要，重复此进程数次。

　　2、 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验进程中。

　　特异性

　　本试剂盒可同时检测重组或天然的植物ABA，且与其它相干蛋白无交叉反应。

　　计算

　　各标准品及样本 值扣除空白孔 值后作图(7点图)，如设置复孔，mm200磨损实验机则应取其保温材料实验机平均值计算。以标准品的浓度为纵坐标(对数坐标)，值为横坐标(对数坐标)，在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线App进行分析，如 curve expert 1.3，根据样品值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　检测范围： 1.56 n插头线温升实验机mol/ml - 100 n纽扣拉力实验机mol/ml，绘制标准曲线请取用以下浓度值：100 nmol/ml，50nmol/ml，25 nmol/ml，12.5 nmol/ml，6.25 nmol/ml，3.12 nmol/ml，1.56nmol/ml。

　　最低检测限：0.39 nmol/ml

　　说明

　　1、 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，

　　本产品可能存在1定的质量技术风险。

　　2、 终究的实验结果与试剂的有效性、实验者的相干操作和当时的实验环境密切相干，请务必

　　准备充足的标本备份。

　　3、 在贮存及温育进程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以避免蒸发和微生物的 污染，由于蛋白水解酶的干扰将致使出现毛病的结果。

　　4、 试剂盒保存：请收到试剂盒后尽快将标准品、检测溶液A和检测溶液B保存于⑵0 ，其余试剂短时间保存请置于4，长时间保存则置于⑵0 。开封后的酶标板要密封加转动接触疲劳实验机干燥剂后保存于⑵0 ，避免湿润。

　　5、 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

　　6、 刚开启的酶联板孔中可能会有少量水样物资，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

　　7、 有效期：6个月。